伏馬毒素是由鐮刀菌產(chǎn)生的高毒性真菌毒素，易污染玉米、飼料及其相關(guān)制品，具有潛在致癌性和臟器損傷風(fēng)險(xiǎn)，是食品安全與質(zhì)量控制的重要檢測(cè)指標(biāo)。由于伏馬毒素本身無強(qiáng)熒光及紫外吸收，直接檢測(cè)靈敏度較低，難以滿足痕量定量分析需求。

本方案依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.240—2023，采用柱后衍生-高效液相色譜-熒光檢測(cè)法。該方法通過免疫親和柱對(duì)樣品進(jìn)行前處理凈化，再結(jié)合鄰苯二甲醛在線衍生技術(shù)生成強(qiáng)熒光衍生物，大幅提高檢測(cè)的靈敏度與特異性。方案適用于食品、飼料等多種基質(zhì)的批量檢測(cè)，可為食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)、質(zhì)量管控及合規(guī)放行提供精準(zhǔn)、可靠的技術(shù)支撐。

1. 檢測(cè)原理

伏馬毒素（FB?/FB?/FB?）分子自帶氨基，在色譜柱分離后，通過Pribolab®MDS 3000柱后衍生儀與鄰苯二甲醛（OPA）+ 巰基試劑在線反應(yīng)，生成強(qiáng)熒光異吲哚衍生物，后經(jīng)檢測(cè)器進(jìn)行定量分析。

2. 儀器方法

2.1 液相方法

色譜柱：Pribolab®伏馬毒素衍生專用色譜柱（貨號(hào):EH04077）

流動(dòng)相：甲酸-水溶液（0.1%）

柱溫：40℃

檢測(cè)波長：激發(fā)波長：335nm；發(fā)射波長：440nm。

進(jìn)樣量：50μL

流速：0.8 mL/min

2.2 衍生方法

衍生試劑：Pribolab®伏馬毒素衍生試劑包（貨號(hào):YS-FB-003）

衍生溫度：40℃

流    速：0.4mL/min

3. 檢測(cè)結(jié)果

分別精密吸取0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL濃度的對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

結(jié)果如下圖所示：

3.2 重復(fù)性

取濃度為  1 μg/mL 的FB1/FB2/FB3標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣 6 針，記錄各針峰面積與保留時(shí)間。結(jié)果顯示，6 針檢測(cè)的FB1峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.20%，F(xiàn)B2峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.17%，F(xiàn)B3峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.33%，符合檢測(cè)方法學(xué)要求。